什么是孢子分離法？ 孢子分離法是利用食用菌成熟的有性孢子即擔(dān)孢子、子囊孢子，無性孢子即厚垣孢子、節(jié)孢子、粉孢子等萌發(fā)成菌絲，來獲得純菌種的一種方法。食用菌栽培，菇農(nóng)最為關(guān)切的問題是菇的產(chǎn)量、質(zhì)量(韌性)、抗病性和商品外觀。一個優(yōu)良菌株的產(chǎn)生，主要來自于野生菌株的采集和馴化，而采用孢子分離法來取得菌種是行業(yè)中普遍采用的方法。由于孢子的數(shù)量大，變異的機會多，因此采用孢子分離法，可以有更多選擇優(yōu)良菌株的機會，而且孢子的生活力強，所得菌種菌齡小，生活力旺盛。但是有些食用菌的擔(dān)孢子不易萌發(fā)成菌絲，還有些食用菌的孢子有兩種或四種極性，單孢分離的菌株有時不產(chǎn)生子實體，必須經(jīng)過交配，得到結(jié)實性的雙核菌絲，才能用于產(chǎn)生。故孢子分離法又有單孢分離法和多孢分離法兩種。
單孢分離法是指每次只取一個擔(dān)孢子，讓它萌發(fā)成菌絲體來獲得純菌種的一種方法。 蘑菇用單孢分離法得到的菌絲，有結(jié)實能力，因此可以采用單孢分離法生產(chǎn)純菌種。其他食用菌如香菇、平菇、金針菇、鳳尾菇、毛木耳等，只有育種時，才用單孢分離法。單孢子分離用多孢子作材料，自由交配育出的菌種，有很多不可知因素，為了科學(xué)地利用孢子，進行單孢子雜交，必須得到單孢子分離物。單孢子分離比多孢子分離麻煩得多。為了使食用菌的孢子彼此分開，最可靠的方法是在顯微鏡下，用顯微鏡操作器挑取一個個已萌發(fā)的孢子單孢進行培養(yǎng)，這種方法要有一定的設(shè)備，只有專門的育種單位才選用這種方法。目前最簡單的方法是采用連續(xù)稀釋法。用無菌水把孢子沖散，降低一定體積中孢子的密度，使最后一滴水中含有1-2個孢子，然后把含1-2個孢子的水滴滴在或涂在瓊脂平板上，培養(yǎng)后，再挑取單個菌落中的菌絲進行培養(yǎng)。經(jīng)鏡檢確認(rèn)是單孢子的分離物時才保留下來，這樣就可以得到單孢子分離的菌株了。單孢子分離用于異宗結(jié)合菌類的雜交育種和同宗結(jié)合的單孢育種。屬異宗結(jié)合的菌類，單孢子分離可以用來作雜交育種。
多孢分離法就是把許多孢子接種在同一培養(yǎng)基上，讓它們萌發(fā)，自由交配來獲得食用菌純菌種一種方法。此法簡單易學(xué)，在生產(chǎn)上經(jīng)常采用。具體操作方法，有以下幾種：
①種菇孢子彈射法：選擇種菇，切去大部分，種菇必須經(jīng)過消毒，以清除沾染在它表面的雜菌孢子。對于子實層已外露的種菇只能用75%酒精在菌蓋表面及菌柄部分進行揩擦消毒。用無菌水沖洗數(shù)遍后再用已滅菌的紗布或脫脂棉、濾紙吸干表面水分。在接種箱或無菌室內(nèi)，把種菇的菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面，漏斗倒蓋在培養(yǎng)皿上面；上端小孔用棉花塞住。培養(yǎng)皿放在一個鋪有紗布的搪瓷盤上，靜置12～20小時，菌褶上的孢子就會散落在培養(yǎng)皿內(nèi)。形成一層粉末狀孢子印（平菇極淡紫色，蘑菇、草菇 為褐色，香菇、金針菇孢子印白色）。用接種針沾取少量孢子在試管中的瓊脂外面或培養(yǎng)皿上劃線接種。待孢子萌發(fā)，生成菌落時，選孢子萌發(fā)早、長勢好的菌落進行試管培養(yǎng)。
還可用孢子采集器收集孢子。方法是選好種菇后，按上述程序，輕輕掀開玻璃鐘罩，將種菇柄朝下插在孢子采收器的鋼絲架上，放在培養(yǎng)皿正中央。隨即蓋好玻璃罩，用紗布將鐘掌周圍塞好。并在紗布上倒少許升汞或無菌水。移入 20℃左右恒溫箱培養(yǎng)。
②褶上涂抹法：按無菌操作分離時；應(yīng)選擇成熟的種菇，用接種針直接插入褶片之間，輕輕抹取褶片表面子實體尚未彈射的孢子，再在培養(yǎng)基上劃線接種。
③鉤懸法：取成熟菌蓋的幾片菌褶或一小塊耳片（黑木耳、毛木耳、白木耳〕，用無菌不銹鋼絲（或鐵絲、棉線等其他懸掛材料）懸掛于三角瓶內(nèi)的培養(yǎng)基的上方，勿使接觸到培養(yǎng)基或四周瓶壁。置適宜溫度下培養(yǎng)、轉(zhuǎn)接即可。
④貼附法：按無菌操作將成熟的菌褶或耳片取一小塊， 用溶化的瓊脂培養(yǎng)基或阿拉伯膠、漿糊等貼附在配管斜面培養(yǎng)基正上方的試管壁上。經(jīng)6～12小時的培養(yǎng)，待孢子落在斜面上，立即把孢子連同部分瓊脂培養(yǎng)基移植到新的試管中培養(yǎng)即可。
不管單孢分離還是多孢分離。想獲得優(yōu)良的母種一定要來自優(yōu)良的種菇。收集孢子用的種菇必須發(fā)育純正、健壯而無病蟲害。種菇的成熟度也要適當(dāng)，對于雙孢蘑菇和草菇那樣有菌膜的食用菌，最好選用菌膜將破而未破的，因為這樣的種菇發(fā)育已成熟，而子實層又未污染，因此能很快散發(fā)出大量的無菌孢子。但是對香菇、側(cè)耳那樣沒有菌膜或菌膜自幼已破的食用菌，可以選取八成熟的、正在釋放孢子的個體，因為剛從擔(dān)子上彈射出來的孢子基本上也是無菌的。以白靈菇為例，種菇的選擇應(yīng)從菌絲生長健壯有力、子實體生長旺盛、出菇均勻的菇房中，挑選菇蓋圓整、呈扇形、色白的單生菇，成熟度要求七八分熟、無病蟲的子實體。種菇采收后處理待用。