榆耳、毛木耳等耳片較厚，組織分離比較容易成功。由于這類耳表面附有大量的雜菌孢子，盡管進(jìn)行嚴(yán)格的表面消毒也很難做到十分徹底，所以，用剪取一小塊子實體的辦法來分離木耳純菌種，成功率是非常低的。但若把這些耳的子實體撕裂，從耳片內(nèi)側(cè)挑取一小塊組織來培養(yǎng)，就會大大提高分離的成功率。具體方法如下：把分離用的新鮮子實體用流水沖洗干凈，用干凈的紗布揩干，放入接種箱內(nèi)，隨后再用無菌水沖洗二三次，用無菌紗布擦干水分，然后以75％酒精進(jìn)行表面消毒?？蓪⒆訉嶓w上下二層撕開，在無菌操作下，用接種針在子實體內(nèi)側(cè)括取半粒芝麻大小的一塊組織，接種到馬鈴薯培養(yǎng)基斜面上即可。
但黑木耳、琥珀木耳、皺木耳的這類的子實體，上下層撕不開，可用解剖刀在子實體邊緣切一斜口，然后沿斜口的方向撕裂，挑取未觸及刀片部分的內(nèi)層，接種于PDA綜合培養(yǎng)基上。25—28℃下培養(yǎng)3—4天后即可看到菌絲萌發(fā)。及時挑取菌絲提純即可獲得成功。
在黑木耳野外普查過程中，我們常常發(fā)現(xiàn)有價值的耳片往往很少，有時還必須采用干耳片將種取出來，那如何用干耳片分離菌種呢？
筆者介紹一下這方面的技術(shù)。1、耳片表面消毒：用70-75%的酒精浸泡干耳片一分鐘。再用無菌水沖洗3次，洗去殘余酒精，最后用無菌濾紙吸凈耳片上的水分。2、耳片組織切塊：在無菌培養(yǎng)皿上，用解剖刀將耳片切成2毫米寬，3-5毫米長快。其目的就是切除被酒精浸泡的邊緣，露出新鮮斷面。3、接種培養(yǎng)：用鑷子尖取一切塊，使組織新鮮斷面與瓊脂培養(yǎng)基表面垂直，并插于培養(yǎng)基中。這樣有利于組織吸水膨脹，菌絲恢復(fù)活力。25—28℃下培養(yǎng)3—4天后即可看到菌絲萌發(fā)。及時挑取菌絲提純即可獲得木耳純菌種。（作者MYB,轉(zhuǎn)載請注明來源于易菇論壇）