【易菇論壇首發(fā)】組織分離法就是指通過(guò)菇體組織分離獲得純菌絲的方法。食用菌的子實(shí)體實(shí)際上就是菌絲體的紐結(jié)物，它具有很強(qiáng)的再生能力。因此，只要切取綠豆大的一小塊菇體組織，把它移植到培養(yǎng)基上，就能獲取純粹的菌絲體。從生物學(xué)的角度來(lái)看，乃是一種無(wú)性繁殖。后代不易發(fā)生變異，能保持原菌株的優(yōu)良特性。雙核菌絲中兩個(gè)核并沒(méi)有融合，即雙親的染色體并沒(méi)有發(fā)生重組，因此組織細(xì)胞沒(méi)有孢子細(xì)胞那樣具有豐富的遺傳性。但是也正由于組織細(xì)胞是雙核細(xì)胞。所以它們都能生育結(jié)實(shí)，不像孢子細(xì)胞那樣需要經(jīng)過(guò)一個(gè)配對(duì)過(guò)程。
組織分離培養(yǎng)的方法較簡(jiǎn)單，取材較廣泛，無(wú)論是幼菇還是成熟菇，只要是新鮮的，即使它只有菌柄，也都能分離培養(yǎng)成菌種。
組織分離最好采用正處于旺盛生長(zhǎng)中的幼嫩子實(shí)體或菇蕾作為分離材料，供組織分離的種耳、種菇，必須來(lái)自優(yōu)良的品系，且要選取幼嫩、肥壯、無(wú)病蟲(chóng)害的優(yōu)良子實(shí)體。 把選出來(lái)的若干種耳、種菇，再按生產(chǎn)要求進(jìn)行系統(tǒng)的比較，擇優(yōu)去劣，把肥壯、飽滿、無(wú)病的種耳、種菇留作分離材料。淋雨或吸水的種耳、種菇易污染雜菌，一般不能作為分離材料。 采取菌蓋與菌柄交接處的組織進(jìn)行分離，效果最好，對(duì)于那些有內(nèi)或外菌幕保護(hù)的菇類來(lái)說(shuō),取在菌幕保護(hù)下的幼嫩菌褶接種，生活力更加旺盛。對(duì)于某些菌根菌，則取用靠近基部的菌柄組織才能成活。
種耳、種菇的表面無(wú)菌處理 為了得到無(wú)雜菌的培養(yǎng)物，種菇表面要用無(wú)菌水沖洗幾次，并用無(wú)菌濾紙吸干或用0.1%的升汞水浸幾分鐘，再用無(wú)菌水沖洗并揩干。只要掌握分離要領(lǐng)，種菇不作表面滅菌處理也是完全可以的。
接種塊的切?。喊逊N菇撕開(kāi)，在菌蓋和菌柄交界處或菌褶處，切取一小塊組織作為接種材料。菌褶靠近子實(shí)體的外緣，容易沾上污物或感染雜菌。所以，分離時(shí)應(yīng)選擇清潔的、菌蓋邊緣向內(nèi)卷的種菇作為分離材料。為了減少帶雜菌的機(jī)會(huì)，切取組織塊時(shí)，應(yīng)盡量取小一些，因?yàn)槿庋劭吹降囊恍K組織，其中就有許多菌絲了，切一小塊不僅可以減少污染，得到純度高的菌種，而且容易成活。但組織塊越小，越容易被接種針燙死。因此，接種針在火焰上過(guò)火消毒后，應(yīng)先冷卻才能接種。
組織塊移植到適宜的培養(yǎng)基上后，應(yīng)放在適合菌絲生長(zhǎng)的溫度下培養(yǎng)，一般溫度為23～26℃。只有這樣，組織塊才可以迅速恢復(fù)生長(zhǎng)，在氣候寒冷的條件下進(jìn)行組織分離，更應(yīng)注意保持一定的溫度。每天檢查試管斜面菌落生長(zhǎng)情況，如從分離的菌肉組織塊上長(zhǎng)出正常的白色菌絲，即分離成功，及時(shí)將生長(zhǎng)出來(lái)的菌絲轉(zhuǎn)移新的試管斜面。若在組織塊附近或其他地方出現(xiàn)其他顏色雜菌生長(zhǎng)應(yīng)予以淘汰。
組織分離法操作簡(jiǎn)便，又不易帶入雜菌，容易獲得純菌種。但對(duì)銀耳、黑木耳等膠質(zhì)菌；因其子實(shí)體中菌絲的含量極少，如用組織分離培養(yǎng)，則往往不易成功。
利用組織分離法得到的菌種，在未做全面的檢測(cè)和測(cè)試之前，對(duì)其品種應(yīng)具有的區(qū)別性、均一性和穩(wěn)定性是一無(wú)所知的，因此不能作為新品種。只有在標(biāo)準(zhǔn)的條件和方法下，以親本為對(duì)照進(jìn)行全面的測(cè)試，其表現(xiàn)的性狀確實(shí)與親本有顯著的差異，而且這些差異的表現(xiàn)個(gè)體間是均一的，在不同的時(shí)間上是可重復(fù)的（即性狀穩(wěn)定）可作為新品種的審定對(duì)象。為了確保栽培效果，組織分離法所制成的菌種在沒(méi)小試之前，不易大面積投入生產(chǎn)。（作者MYB,轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明來(lái)源于易菇論壇）