摘要：設計能夠鑒定小菇屬真菌(Mycena sp.)的引物,可準確而快速發(fā)現(xiàn)萌發(fā)菌分離材料,從而分離小菇屬真菌,對提高天麻種子萌發(fā)率及天麻產(chǎn)量具有重要現(xiàn)實價值。同時對全面了解小菇屬真菌在自然環(huán)境中的物種分布情況具有一定生態(tài)學意義。根據(jù)適用于檢測"環(huán)境DNA"中某物種的引物設計驗證框架,運用Primer Premier v5.0軟件,在ITS序列區(qū)間內(nèi)設計了適用于小菇屬真菌DNA快速檢測的5對引物,并對他們的特異性、靈敏度和實際運用能力進行了評估。其中,特異性較好的4對引物分別為M52-2、M22-3、M11-4和BZZ-5。通過對來自3個門、125個屬的125株真菌進行特異性測試,能測出的菌株數(shù)量分別為2.4%、6.4%、4.0%和7.2%。靈敏度較好的M22-3和BZZ-5兩對引物能檢測到小菇屬真菌菌絲在土壤中的最小濃度均為0.033%,且能成功從天麻原球莖和種子萌發(fā)菌塘土壤樣本總DNA中檢測出小菇屬真菌的存在。結果表明,經(jīng)過利用2對和多對引物,可在實際運用中快速篩選和發(fā)現(xiàn)小菇屬真菌。
基金：國家自然科學基金(31360153)； 2015年度昭通天麻共生優(yōu)良“兩菌”選育項目(201501)；
關鍵詞：天麻萌發(fā)菌; 蘭科植物; ITS基因; 靈敏度; 快速篩選;