【作者】歐陽(yáng)萍蘭 李瓊潔 郭麗瓊 林俊芳 葉志偉 魏韜 鄭倩望 伍土恒 羅潤(rùn)

【機(jī)構(gòu)】華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院&食品生物技術(shù)研究所 廣東省微生態(tài)制劑工程技術(shù)研究中心

摘要：對(duì)金針菇(Flammulina velutipes)冷誘導(dǎo)相關(guān)的組氨酸激酶基因HK1和HK2構(gòu)建了基因組編輯(CRISPR/Cas9)pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA表達(dá)載體,探索了金針菇菌絲體及原生質(zhì)體對(duì)潮霉素的最低敏感濃度,利用PEG介導(dǎo)的方法將表達(dá)載體pgfvs-Cas9-HK1/HK2-gRNA轉(zhuǎn)化金針菇原生質(zhì)體,經(jīng)潮霉素篩選后的擬轉(zhuǎn)化子再進(jìn)行PCR鑒定。結(jié)果顯示:金針菇菌絲體及原生質(zhì)體對(duì)潮霉素的最低敏感濃度均為50μg/mL;經(jīng)潮霉素篩選后的部分?jǐn)M轉(zhuǎn)化子成功擴(kuò)增出Cas9的部分片段,攜帶有HK1、HK2基因載體的Cas9蛋白基因成功整合到了金針菇的基因組中,兩個(gè)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化率分別為24.1%和12.5%。 

基金：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31372116、31572178)； 廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)食用菌體系項(xiàng)目(2016LM1125、2016LM1126)；

關(guān)鍵詞：金針菇; CRISPR/Cas9; PEG介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化;