【作者】文晴 鄒明 靳橄 郭丹丹 魏忠方 申進(jìn)文

【機(jī)構(gòu)】河南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)微生物酶工程重點實驗室

摘要：尿素是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用較為廣泛的一種氮素化肥,而脲酶(EC3.5.1.5)是尿素分解利用的關(guān)鍵酶。本文以糙皮側(cè)耳Pleurotus ostreatus栽培菌株New 831為試驗材料,探究了糙皮側(cè)耳對尿素的利用情況,結(jié)果表明:糙皮側(cè)耳可利用尿素作為唯一氮源,平板培養(yǎng)時尿素最適添加量為20mmol/L;在液體搖瓶培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)液中的銨根濃度表現(xiàn)為先急劇升高后緩慢降低。通過對P. ostreatus PC15菌株基因組分析,獲得了一個功能注釋為脲酶的基因,并克隆獲得了其全長基因組DNA(gDNA)和編碼區(qū)(CDS)片段,命名為Pourease。結(jié)果表明:Pourease基因的gDNA和CDS長度分別為3 003bp和2 517bp,由10個外顯子和9個內(nèi)含子組成;Pourease蛋白由838個氨基酸組成,預(yù)測分子量為90.03kDa,與SDS-PAGE分析結(jié)果相符;Pourease蛋白與細(xì)菌、真菌和植物來源的脲酶具有52%–82%的一致性,且含有脲酶保守的鎳離子結(jié)合位點;與洋刀豆脲酶空間結(jié)構(gòu)類似,Pourease蛋白也以同源三聚體的形式存在。 

 

基金：國家自然科學(xué)基金(31701980)； 國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(CARS-20)； 河南省重點科技攻關(guān)項目(182102110017)； 河南省高等學(xué)校重點科研項目(17A180022)~~；

 

關(guān)鍵詞：糙皮側(cè)耳; 尿素; 銨根; 脲酶; SDS-PAGE分析; 同源三聚體;