【機(jī)構(gòu)】吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心

摘要：有害疣孢霉Hypomyces perniciosus是引起雙孢蘑菇Agaricus bisporus濕泡病的病原真菌,目前其致病分子機(jī)理尚不清楚,而高效穩(wěn)定的遺傳轉(zhuǎn)化體系和突變體庫構(gòu)建是挖掘和研究病原菌致病基因的基礎(chǔ)和有效手段。因此,本實(shí)驗(yàn)以高致病力的有害疣孢霉菌株WH001為研究對(duì)象,采用凍融法將雙元載體p BHt1轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌AGL-1中,建立并優(yōu)化根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系,并利用其構(gòu)建T-DNA插入突變體庫。結(jié)果表明有害疣孢霉菌株WH001的潮霉素(Hygromycin,Hyg)耐受濃度為250ng/L,當(dāng)農(nóng)桿菌侵染液濃度OD600=1,侵染時(shí)間為30min,乙酰丁香酮(Acetosyringone,AS)濃度為1.5mg/mL,共培養(yǎng)時(shí)間為3d時(shí),轉(zhuǎn)化體系效率最高。然后利用該優(yōu)化體系構(gòu)建有害疣孢霉的突變體庫,通過PCR檢測(cè)和形態(tài)學(xué)鑒定獲得若干表型發(fā)生改變、穩(wěn)定遺傳的T-DNA插入突變體,與原菌種WH001相比,突變體在菌絲形態(tài)、生長速率、色素分泌和致病力等方面發(fā)生改變。本研究為進(jìn)一步挖掘有害疣孢霉未知基因功能、解析生物學(xué)性狀、探討致病分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 

 

基金：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201503137)； 國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃(973計(jì)劃)(2014CB138305)； 國家自然科學(xué)基金(31471926)~~；

 

關(guān)鍵詞：有害疣孢霉; 農(nóng)桿菌; 轉(zhuǎn)化; 突變體庫; 表型變異;