【作者】張雷剛 羅淑芬 周宏勝 胡花麗 李鵬霞

【機(jī)構(gòu)】江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝產(chǎn)品產(chǎn)后處理工程實(shí)驗(yàn)室

摘要：以生防真菌黑附球菌原生質(zhì)體為受體、潮霉素抗性基因(hph)為篩選標(biāo)記,應(yīng)用PEG介導(dǎo)法進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究。潮霉素敏感性測(cè)試結(jié)果表明,黑附球菌對(duì)潮霉素的耐受濃度為50mg/L。PEG介導(dǎo)的黑附球菌原生質(zhì)體最佳遺傳轉(zhuǎn)化體系為:30℃下用2%裂解酶酶解黑附球菌菌絲2h,過(guò)濾收集原生質(zhì)體,經(jīng)MTC清洗重懸后將質(zhì)粒p YF11-hph轉(zhuǎn)化黑附球菌原生質(zhì)體,在RM培養(yǎng)基中混勻再生;經(jīng)潮霉素藥劑篩選和PCR驗(yàn)證,表明外源基因hph已轉(zhuǎn)入到黑附球菌中并獲得穩(wěn)定表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)成功地建立了穩(wěn)定的PEG介導(dǎo)的黑附球菌遺傳轉(zhuǎn)化體系,為研究其代謝途徑、生防機(jī)制及構(gòu)建工程菌株提供了技術(shù)保障。 

 

基金：農(nóng)作物生物災(zāi)害綜合治理教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部華東作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金； 江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[CX(17)3012]~~；

 

關(guān)鍵詞：PEG介導(dǎo); 黑附球菌; 遺傳轉(zhuǎn)化; 原生質(zhì)體; 工程菌株;