【作者】申永銘郭成瑾王喜剛沈瑞清陳愛(ài)昌胡小平

【機(jī)構(gòu)】西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室寧夏農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所甘肅定西市植保植檢站

摘要：立枯絲核菌Rhizoctonia solani融合群3(anastomosis group 3,AG3)是引發(fā)馬鈴薯黑痣病的主要病原菌,嚴(yán)重威脅著馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。菌核是馬鈴薯黑痣病菌在土壤中的主要存活結(jié)構(gòu),是馬鈴薯黑痣病的初侵染源,其密度直接影響馬鈴薯黑痣病的發(fā)病率和嚴(yán)重程度。為快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出土壤中菌核的密度,本研究以立枯絲核菌AG3轉(zhuǎn)錄間區(qū)(ITS)特異性引物RsTqF1/RsTqR1擴(kuò)增產(chǎn)物的重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品,構(gòu)建SYBR Green I實(shí)時(shí)定量PCR(q PCR)檢測(cè)體系,結(jié)合水篩法與Fast DNA?Spin Kit for Soil土壤DNA提取試劑盒對(duì)土壤樣品進(jìn)行DNA提取,建立了循環(huán)域值(Ct)與土壤中立枯絲核菌AG3菌核密度的關(guān)系,并與傳統(tǒng)選擇性培養(yǎng)基篩選法進(jìn)行比較。結(jié)果表明,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)靈敏度比常規(guī)PCR高10倍,土壤中菌核密度n(g/g土)和Ct值之間的關(guān)系為:n=10(9.6917‐Ct)/3.4558。相比較于選擇性培養(yǎng)基篩選法,水篩q PCR法能夠更加快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出土壤中立枯絲核菌的菌核密度。 

 

基金：寧陜科技合作項(xiàng)目~~；

 

關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)定量PCR; 水篩法; 馬鈴薯黑痣病;