【作者】安莉穎 易欣欣 秦麗娜 施思 陶勇 伍紅 董志揚(yáng)

【機(jī)構(gòu)】西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院中國(guó)科學(xué)院微生物研究所

【摘要】以里氏木霉Trichoderma reesei重要工業(yè)生產(chǎn)菌Rut C30為出發(fā)菌株,通過(guò)等離子體(ARTP)誘變篩選,以5‐氟乳清酸(5‐FOA)和尿苷(Uridine)進(jìn)行篩選,獲得一株pyr4基因缺陷株Rut C30ΔU3。用含有野生型里氏木霉pyr4基因的互補(bǔ)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化突變株,可回復(fù)野生性狀。經(jīng)測(cè)序發(fā)現(xiàn)其pyr4基因在核酸序列多個(gè)位點(diǎn)發(fā)生突變,其中包括兩個(gè)錯(cuò)義突變和一個(gè)移碼突變,從而導(dǎo)致乳清酸核苷‐5′‐磷酸脫羧酶失活。經(jīng)遺傳穩(wěn)定性研究分析,傳代5次后仍保持良好的尿苷依賴(lài)性、去葡萄糖阻遏以及高產(chǎn)纖維素酶特性。經(jīng)實(shí)驗(yàn)篩選獲得了pyr4基因缺陷菌株可作為基因表達(dá)系統(tǒng)的受體菌株,建立了以尿苷營(yíng)養(yǎng)缺陷為篩選標(biāo)記的木霉轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。 

【基金】國(guó)家自然科學(xué)基金(No.30970073)； 國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃(973項(xiàng)目)(No.2011CB707402)； 國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(No.2012AA092103)；

【關(guān)鍵詞】里氏木霉; 等離子體; 誘變; pyr4基因;