【作者】劉莉 肖招燕 郭麗瓊 林俊芳 尤琳烽 廖靜文

【機構(gòu)】華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物質(zhì)能研究所

【摘要】對猴頭菌Hericium erinaceus原生質(zhì)體制備的各種因素進行比較研究,結(jié)果表明,猴頭菌原生質(zhì)體制備的最佳體系為:液體培養(yǎng)5d的猴頭菌絲,以0.6mol/L KCl作為穩(wěn)滲劑,加入含1.0%纖維素酶+1.0%蝸牛酶+1.0%溶壁酶的復(fù)合酶,在30℃酶解猴頭菌絲3h時,原生質(zhì)體得率達到3.0×106個/mL。潮霉素敏感性測試表明,猴頭菌在PDSA固體培養(yǎng)基上的潮霉素最低篩選濃度為60μg/mL。采用PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體法,將質(zhì)粒pBgGI‐hph(含有靈芝gpd1‐Gl啟動子和潮霉素抗性基因hph)轉(zhuǎn)化猴頭菌原生質(zhì)體,經(jīng)潮霉素初步篩選以及PCR鑒定,表明有4株猴頭菌擬轉(zhuǎn)化子的基因組擴增出hph基因;轉(zhuǎn)化子經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接后進行Southern雜交驗證,結(jié)果表明4個轉(zhuǎn)化子的基因組中均穩(wěn)定整合了hph抗性基因。 

【基金】國家自然科學(xué)基金(No.31071837； No.31272217)“食用真菌組合表達紫杉醇及其中間產(chǎn)物的基礎(chǔ)研究”和“食用真菌組合表達白藜蘆醇的研究”；

【關(guān)鍵詞】猴頭菌; 原生質(zhì)體制備; PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化;