【作者】張帆 鐘威 穆虹 李剛

【機構(gòu)】華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院廣東省植物功能基因組和生物技術(shù)重點實驗室中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

【摘要】尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphorylase,UGPase)是多糖生物合成過程中重要的酶,水稻基因組中存在兩個UGPase同源基因分別命名為OsUgp1和OsUgp2。構(gòu)建了由構(gòu)巢曲霉3-磷酸甘油醛脫氫酶基因啟動子驅(qū)動OsUgp2表達的真菌過量表達載體,并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將OsUgp2基因轉(zhuǎn)入紫芝中,獲得了潮霉素抗性的轉(zhuǎn)化菌株。PCR和Southern雜交結(jié)果顯示OsUgp2基因成功整合到受體紫芝基因組中。半定量RT-PCR檢測結(jié)果顯示外源基因OsUgp2在紫芝轉(zhuǎn)化菌株中有表達,且在3個獨立的轉(zhuǎn)化菌株中的表達量各有不同;UGPase酶活性測定結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)基因菌株中UGPase酶活性或比活力均較野生型對照菌株有一定的增加,且在3個獨立轉(zhuǎn)化菌株中的增加趨勢與RT-PCR檢測結(jié)果相一致。采用恒重法和苯酚-硫酸法分別測定了轉(zhuǎn)化菌株和野生型對照菌株的生物量、胞內(nèi)多糖和胞外多糖的含量,結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)基因菌株的生物量、胞內(nèi)多糖和胞外多糖含量明顯增加。采用了SPSS13.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析軟件分析了UGPase酶活力與多糖含量之間的相關(guān)性,結(jié)果表明紫芝菌絲體的多糖總量、胞內(nèi)多糖含量和胞外多糖含量與UGPase的酶活力都存在高度的相關(guān)性,其中胞內(nèi)多糖含量與UGPase酶活力的相關(guān)系數(shù)最高達0.98,說明過量表達的OsUgp2可能主要參與胞內(nèi)多糖的合成。 

【基金】國家自然科學(xué)基金“水稻花藥特異表達UDPG焦磷酸化酶基因的功能分析”(No.30370800)；

【關(guān)鍵詞】尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶; 過量表達; 靈芝; 多糖;