【作者】張桂敏 曾毓芳 陳雅蘭 屠俊 何家亨 馬立新

【機構(gòu)】湖北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

【摘要】將一段含有質(zhì)粒ColE1復(fù)制起始區(qū)(ori)和氨芐青霉素抗性基因(bla)的DNA片段插入到釀酒酵母rDNA片段中部的EcoRI或HpaI位點之間,在pYES2載體的基礎(chǔ)上構(gòu)建了兩個rDNA介導(dǎo)的釀酒酵母穩(wěn)定表達載體pHBM367E或pHBM367H。將黑曲霉糖化酶基因?qū)胼d體pHBM367H,獲得表達載體pHBM166。為生物安全性的考慮,pHBM166經(jīng)HpaI酶切去掉2.2kb的ColE1ori和bla片段后轉(zhuǎn)化釀酒酵母Y33菌株,獲得不含任何抗生素抗性基因的工程菌。隨后,對糖化酶基因在釀酒酵母中的表達、穩(wěn)定性進行了分析,結(jié)果顯示,rDNA介導(dǎo)的糖化酶基因在釀酒酵母中的表達呈現(xiàn)不同的劑量效應(yīng),挑選高表達的菌株傳80代之后仍能保持其產(chǎn)糖化酶的穩(wěn)定性。 

【基金】國家自然科學(xué)基金(No.30600014)； 湖北省自然科學(xué)基金(No.2008CDB058)； 湖北省教育廳重點項目(No.D20101001)； 武漢市科技攻關(guān)計劃(No.201021037380-3)；

【關(guān)鍵詞】釀酒酵母; rDNA介導(dǎo); 糖化酶; 生物安全性; 劑量效應(yīng);