【作者】張婕 謝晨 郭曉紅 李多川
【機(jī)構(gòu)】山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院環(huán)境生物系
摘要：研究通過(guò)RT-PCR和Tail-PCR技術(shù)從嗜熱子囊菌原變種Thermoascus aurantiacus var.aurantiacus中克隆了一個(gè)幾丁質(zhì)酶同源基因。該基因全長(zhǎng)1,253bp,包含一個(gè)由1,197個(gè)堿基構(gòu)成的開(kāi)放閱讀框,編碼398個(gè)氨基酸。序列比對(duì)分析表明,該基因編碼蛋白屬于糖苷水解酶18家族的幾丁質(zhì)酶。利用基因重組的方法構(gòu)建酵母分泌型表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)化畢赤酵母。在甲醇的誘導(dǎo)下,重組蛋白得到了高效表達(dá),第6天的表達(dá)量最高,達(dá)到0.433g/L,酶活力為28.96U/mg,同時(shí)對(duì)表達(dá)的幾丁質(zhì)酶進(jìn)行了純化,SDS-PAGE檢測(cè)該蛋白的分子量為43.9kDa。該幾丁質(zhì)酶的最適反應(yīng)溫度為60℃,最適反應(yīng)pH值為8.0,70℃處理30min仍有45%的相對(duì)酶活,具有較好的熱穩(wěn)定性及工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。
基金：國(guó)家“863”計(jì)劃；
關(guān)鍵詞：幾丁質(zhì); 嗜熱真菌; 嗜熱酶; 編碼基因; 畢赤酵母;