【作者】王曉慧 應(yīng)盛華 馮明光
【機(jī)構(gòu)】浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物研究所
摘要：首次從黑曲霉Aspergillus niger全基因組中克隆出黑曲霉硫氧還原蛋白基因AnTrx,并對(duì)其編碼蛋白的第33-37位保守區(qū)的活性位點(diǎn)實(shí)施定點(diǎn)突變C34S、C37S及C34S-C37S,獲得相應(yīng)的3個(gè)定點(diǎn)突變基因。將野生型AnTrx及其突變子分別在大腸桿菌Escherichia coli中誘導(dǎo)表達(dá),比濁法測(cè)定純化的各表達(dá)產(chǎn)物還原牛胰島素α與β鏈之間二硫鍵的活性。結(jié)果表明,AnTrx的3個(gè)突變體都不表現(xiàn)明顯催化活性。當(dāng)突變型與野生型AnTrx等量混合后,發(fā)現(xiàn)突變型AnTrx-C34S可顯著提高野生型AnTrx的催化效率,而突變型AnTrx-C37S卻無此功能。由此證明,AnTrx活性結(jié)構(gòu)域的第37位Cys殘基上的巰基能參與攻擊硫氧還蛋白和底物蛋白所形成的二硫鍵而釋放被還原的底物蛋白,而第34位Cys殘基同其他微生物的同一活性域一樣參與硫氧化還蛋白與底物的結(jié)合。這一結(jié)果有助于認(rèn)識(shí)真菌硫氧還蛋白第37位活性位點(diǎn)的作用。
基金：國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No.30930018)； 國(guó)家“973計(jì)劃”(No.2009CB118904)；
關(guān)鍵詞：定點(diǎn)突變; 催化活性; 比濁法;