【作者】鄭艷 周波 宋寧寧 李多川
【機(jī)構(gòu)】山東農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物系
【摘要】疏棉狀嗜熱絲孢菌Thermomyces lanuginosus可產(chǎn)生具有重要工業(yè)生產(chǎn)價(jià)值的脂肪酶。根據(jù)已報(bào)道的相應(yīng)序列設(shè)計(jì)特異引物,綜合運(yùn)用PCR、RT-PCR技術(shù)克隆到脂肪酶基因的全長(zhǎng)DNA和cDNA序列。其中DNA序列長(zhǎng)1071bp,包含876bp的開(kāi)放閱讀框以及3段內(nèi)含子;cDNA序列長(zhǎng)885bp。結(jié)構(gòu)基因編碼蛋白包含292個(gè)氨基酸,前17個(gè)氨基酸構(gòu)成信號(hào)肽。序列提交GenBank,登錄號(hào)分別為EU022703和EU370914。將脂肪酶基因cDNA序列的開(kāi)放閱讀框克隆到酵母分泌型表達(dá)載體pPIC9K中,轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115得到重組子且實(shí)現(xiàn)了分泌表達(dá)。將重組子誘導(dǎo)產(chǎn)酶,在培養(yǎng)溫度30℃、甲醇添加量1%的情況下,小規(guī)模發(fā)酵量達(dá)0.93mg/mL,其分泌表達(dá)的最高酶活為7.2U/mL。重組酶最適反應(yīng)溫度和pH分別是60℃和8.0。表達(dá)蛋白在60℃保溫1h后仍有完全酶活,具有較高的熱穩(wěn)定性。
【基金】國(guó)家“863”計(jì)劃(No.2006AA10Z304)；
【關(guān)鍵詞】?jī)?nèi)含子; 成熟蛋白; 誘導(dǎo); 分泌表達(dá); 重組酶; 最適反應(yīng)溫度; 最適反應(yīng)pH; 熱穩(wěn)定;