【作者】曲廣林 李仕貴 徐正君 王玉平 黃文娟 林瑜凡 萬佳 馬炳田

【機(jī)構(gòu)】四川農(nóng)業(yè)大學(xué)水稻研究所

【摘要】由立枯絲核菌Rhizoctonia solani引起的水稻紋枯病(rice sheath blight)是水稻三大病害之一。G蛋白β亞基(G-protein beta-subunit)編碼的蛋白作為重要的信號(hào)傳導(dǎo)蛋白,在其致病分子機(jī)制中起著重要作用。為了解G蛋白β亞基基因的作用方式,本文根據(jù)同源物種G蛋白β亞基相關(guān)序列設(shè)計(jì)引物,通過PCR(polymerase chain reaction)和RT-PCR(reverse transcriptase PCR)技術(shù),獲得了以水稻為寄主的立枯絲核菌G蛋白β亞基(G-protein beta-subunit of rice Rhizoctonia solani,簡(jiǎn)寫gbrrs1)的基因序列和開放閱讀框ORF(open reading frame)(GenBank登錄號(hào)EU267677)。該基因全長(zhǎng)1867bp,含有4個(gè)內(nèi)含子和5個(gè)外顯子,各內(nèi)含子長(zhǎng)度在54bp-65bp,且序列均符合5′-gt……ag-3′模式。開放閱讀框1047bp,編碼348aa,推測(cè)的蛋白質(zhì)分子量為38.23kDa,等電點(diǎn)為6.54。該蛋白質(zhì)具有2個(gè)alpha-helix和7個(gè)betasheet的二級(jí)結(jié)構(gòu),每個(gè)beta sheet又包含4個(gè)beta-strand。gbrrs1在N端有2個(gè)alpha-helix,緊接著是由7個(gè)beta sheet由無規(guī)則卷曲連接形成的桶形結(jié)構(gòu)。GenBank Blast結(jié)果表明,gbrrs1與四種真菌生物G蛋白β亞基的氨基酸序列同源性較高,與Lentinula edodes(AAT74567.1)、Coprinopsis cinerea(EAU92269)、Ustilago maydis(AAN33051)和Filobasidiella neoformans(AAD03596)的一致性分別達(dá)到了89%、88%、81%和81%。將gbrss1的開放閱讀框克隆于原核融合表達(dá)載體pGEX-4T-2中,經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo),獲得了相應(yīng)蛋白的表達(dá)。   

【基金】教育部長(zhǎng)江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(No.IRT0453)；

【關(guān)鍵詞】信號(hào)傳導(dǎo); 開放閱讀框; 原核表達(dá);