【作者】范艷華 張永軍 羅志兵 馮靜 方衛(wèi)國(guó) 裴炎

【機(jī)構(gòu)】農(nóng)業(yè)部生物技術(shù)與作物品質(zhì)改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 重慶市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 西南大學(xué)生物技術(shù)中心農(nóng)業(yè)部生物技術(shù)與作物品質(zhì)改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 重慶市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 西南大學(xué)生物技術(shù)中心 重慶400716

【摘要】我們從球孢白僵菌中克隆了絲氨酸蛋白酶Pr1類基因CDEP-1。為明確CDEP-1的功能、評(píng)價(jià)其在害蟲生物防治中的潛力,需要大量制備具有生物活性的CDEP-1編碼蛋白。由于大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)真核基因存在產(chǎn)物復(fù)性困難的問(wèn)題,本文利用畢赤酵母系統(tǒng)來(lái)表達(dá)CDEP-1。結(jié)果表明,CDEP-1可在畢赤酵母中高效的分泌表達(dá),而且產(chǎn)物活性高,甲醇誘導(dǎo)48h后上清液中的酶活即可達(dá)到38,266U/L。誘導(dǎo)表達(dá)的上清液經(jīng)濃縮后進(jìn)行凝膠過(guò)濾層析,得到了CDEP-1的初純品,蛋白質(zhì)含量為50mg/L。將純化的蛋白酶CDEP-1免疫家兔,制備了CDEP-1的抗血清。Westernblotting分析表明,制備的抗血清可特異性地檢測(cè)CDEP-1。 

【基金】國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973)項(xiàng)目(2003CB114203)； 國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863)項(xiàng)目(2002AA245021)；

【關(guān)鍵詞】毒力因子; 凝膠過(guò)濾層析; 抗血清;