【作者】張煜 劉剛 余少文 湯新 邢苗

【機(jī)構(gòu)】深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 深圳市微生物基因工程重點(diǎn)實驗室 深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院深圳市微生物基因工程重點(diǎn)實驗室 深圳518060

【摘要】本工作采用巴氏畢赤酵母Pichiapastoris表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行了里氏木霉Trichodermareesei纖維二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseII)的表達(dá)。用RT-PCR的方法從經(jīng)稻草粉誘導(dǎo)的里氏木霉培養(yǎng)物中分離出纖維二糖水解酶Ⅱ的基因,將其插入到巴氏畢赤酵母的表達(dá)載體pPICZαA中,并使之處于α-因子信號肽序列的下游,得到重組質(zhì)粒pPICZαA-cbh2。通過電穿孔的方法用線性化的pPICZαA-cbh2轉(zhuǎn)化巴氏畢赤酵母GS115菌株,經(jīng)過大量篩選后得到可以高效表達(dá)纖維二糖水解酶的畢赤酵母菌株P(guān).pastorisCBHⅡ1。在甲醇誘導(dǎo)的條件下培養(yǎng)P.pastorisCBHⅡ1,培養(yǎng)液中的CMC活性可達(dá)到3.82U/mL,SDS-PAGE分析結(jié)果表明纖維二糖水解酶在P.pastorisCBHⅡ1中的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于里氏木霉。對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了LC-MS分析,結(jié)果表明所表達(dá)的蛋白為里氏木霉的纖維二糖水解酶。 

【基金】深圳市科技計劃重點(diǎn)項目資助；

【關(guān)鍵詞】纖維素酶; 整合表達(dá); 液質(zhì)聯(lián)用; 羧甲基纖維素;