【作者】李剛 王強(qiáng) 劉秋云 李寶健

【機(jī)構(gòu)】中山大學(xué)基因工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中山大學(xué)基因工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 廣州510275

【摘要】本文首次建立了一種通過PEG轉(zhuǎn)化緩沖液將外源基因轉(zhuǎn)入靈芝的方法,轉(zhuǎn)化頻率約為5~6個(gè)/mg(抗性轉(zhuǎn)化子/質(zhì)粒+107個(gè)原生質(zhì)體)。轉(zhuǎn)化子在不含HmB的培養(yǎng)基上經(jīng)5代以上的繼代培養(yǎng)后仍可以穩(wěn)定表達(dá)HmB抗性。Southernblot檢測證明外源基因已經(jīng)整合到了靈芝的基因組DNA中。本研究為通過基因工程手段定向、快速改良靈芝藥用品質(zhì)以及利用靈芝發(fā)酵方法生產(chǎn)一些具有重大經(jīng)濟(jì)價(jià)值的外源蛋白等應(yīng)用奠定基礎(chǔ),并且也有助于我們進(jìn)一步了解靈芝這一大型真菌中的基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)制。 

【基金】廣州市科技局靈芝重大攻關(guān)項(xiàng)目基金資助(2001-Z-006-01)；

【關(guān)鍵詞】原生質(zhì)體; HmB; pAN7-1; 轉(zhuǎn)化效率;