【作者】李紅霞 周明國(guó) 陸悅健

【機(jī)構(gòu)】南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部病蟲(chóng)監(jiān)測(cè)與治理重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部病蟲(chóng)監(jiān)測(cè)與治理重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室 南京210095

【摘要】通過(guò)保守的寡核苷酸引物B1/B3擴(kuò)增出油菜菌核病菌MBCHR和MBCS菌株的部分β-微管蛋白基因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)編碼的198位氨基酸由Glu(GAG)突變?yōu)锳la(GCG),表現(xiàn)高水平抗藥性。根據(jù)MBCHR菌株的突變?cè)O(shè)計(jì)2個(gè)快速檢測(cè)方法:第一種方法是根據(jù)MBCHR菌株197和198位密碼子(GACGAG→GACGCG)形成ThaI酶切位點(diǎn)(3’CGCG 5’),將B1/B3的擴(kuò)增產(chǎn)物874bp片段酶切成193bp和681bp片段,而MBCS菌株的PCR產(chǎn)物不被酶切;第二種方法用198位突變密碼子作為3’末端堿基設(shè)計(jì)2個(gè)等位基因特異性寡核苷酸引物(ASO)用于“nested”PCR或直接從基因組DNA擴(kuò)增。通過(guò)PCR擴(kuò)增和ThaI酶切能直接檢測(cè)油菜菌核病菌的MBCHR和MBCS菌株,所得結(jié)果與傳統(tǒng)菌落直徑法相吻合。 

【基金】國(guó)家“863”計(jì)劃(2001AA249041)； 國(guó)家自然科學(xué)基金(30070510)；

【關(guān)鍵詞】植物病原真菌; 苯并咪唑類殺菌劑;