【作者】黃河 毛偉敏 鄭儒永

【機(jī)構(gòu)】中國科學(xué)院微生物研究所真菌地衣系統(tǒng)學(xué)開放研究實(shí)驗(yàn)室

【摘要】應(yīng)用一對(duì)寡核苷酸引物ITS1與ITS4對(duì)核DNAG＋C百分?jǐn)?shù)小于30％的小克銀漢霉（Cunninghamella）屬的核糖體DNA（rDNA）內(nèi)轉(zhuǎn)錄間區(qū)（YTS）進(jìn)行了擴(kuò)增。測(cè)試的屬于10個(gè)種和變種的22株菌都得到了擴(kuò)增產(chǎn)物。在同屬不同種之間擴(kuò)增的ITS片段長(zhǎng)度有巨大差別。據(jù)此可分為三組。這三組所含分類群數(shù)及其DNA長(zhǎng)度分別為；第一組4種1變種，小于764堿基對(duì)（bp）；第二組2種，765～824bp；第三組2種1變種，大于825bp。所研究的許多種中，特別是第三組，單憑其PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度就能區(qū)分開來。但在第一、二組就需借助限制性內(nèi)切酶的分析才能予以區(qū)分。我們選用了RsaI，TaqI；Tru9I，和HinfI4種限制性內(nèi)切酶，對(duì)所有擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了限制性片段長(zhǎng)度多型性（RFLPs）的分析。在雅致小克銀漢霉（Celegans）、巴西玉蕊小克銀漢霉（Cbertholletiae）、和布拉氏霉（Cblakesleeana）各種的限制性酶切圖譜，種內(nèi)非常一致而種與種之間有差別。反之，在某些種其限制性酶切圖譜不僅種間互不相同，在種內(nèi)不同株之間也出現(xiàn)1～3種酶切圖型的差異。在這種情況下，只能綜合各種資料才能將它們區(qū)分開來。本研究肯定了PCR－RFLP在區(qū)分小克銀漢霉種和變種上的意義，并發(fā)現(xiàn)種內(nèi)個(gè)體的差異。這在我們后來所進(jìn)行的序列分析研究中得到了進(jìn)一步的證實(shí)。 

【關(guān)鍵詞】小克銀漢霉屬; 毛霉目; 分類; PCR; 限制性片段長(zhǎng)度多型性; 內(nèi)轉(zhuǎn)錄間區(qū);