誤食野生蘑菇中毒事件近年來(lái)在我國(guó)頻頻發(fā)生，已成為我國(guó)食物中毒事件中導(dǎo)致死亡的最主要因素，并且80%以上的蘑菇中毒死亡都是由劇毒的鵝膏菌所引起。中毒后蘑菇種類的早期鑒定對(duì)于中毒診斷和治療具有非常重要的作用，然而，由于鵝膏菌物種的多樣性以及往往中毒現(xiàn)場(chǎng)樣本的不完整性，形態(tài)鑒定又需要專業(yè)分類工作者，同時(shí)，目前的分子生物學(xué)鑒定需要PCR儀和DNA測(cè)序，所需時(shí)間長(zhǎng)，難以滿足基層疾控和醫(yī)療單位對(duì)毒蘑菇中毒后需要快速鑒定毒源的要求。

　　湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院真菌研究室陳作紅教授課題組利用兩種恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)——環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）和超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)（hyperbranched rolling circle amplification，HRCA），基于α-鵝膏毒肽基因（α-AMA）序列和核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）序列設(shè)計(jì)了一系列引物和探針，建立了一系列針對(duì)劇毒鵝膏菌的快速分子檢測(cè)方法。可以很好的鑒定和區(qū)分親緣關(guān)系非常近的劇毒鵝膏各物種，以及準(zhǔn)確識(shí)別和區(qū)分劇毒鵝膏和非劇毒鵝膏。同時(shí)，這些方法相比傳統(tǒng)的PCR法，具有更高的特異性和靈敏性，簡(jiǎn)單快速，成本低，僅需要一個(gè)恒溫水浴鍋，1-2小時(shí)內(nèi)就能完成檢測(cè)反應(yīng)，通過(guò)染料顏色變化即能判斷反應(yīng)結(jié)果。這些方法非常適合于基層單位推廣和現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用，對(duì)于蘑菇中毒物種的快速鑒定和中毒患者的診斷、治療具有非常重要的意義。

　　2019年6月17日和18日，研究成果“Universal Identification of Lethal Amanitas by Using Hyperbranched Rolling Circle Amplification based on α-amanitin Gene Sequences”和“Development and evaluation of Isothermal Amplification Methods for Rapid Detection of Lethal Amanita Species”分別發(fā)表在Food Chemistry（1區(qū)，IF=5.399）和Frontiers in Microbiology期刊上（2區(qū)，IF=4.259），兩篇論文的第一作者均為何正蜜博士生，通訊作者為陳作紅教授。該研究得到了國(guó)家自然科學(xué)基金、湖南省生態(tài)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科的支持。
      陳作紅教授表示：“這篇文章的創(chuàng)新就在于以近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的鵝膏毒素基因?yàn)榘悬c(diǎn)設(shè)計(jì)了特異性鎖式探針，基于鵝膏毒素基因來(lái)區(qū)分劇毒鵝膏和非劇毒鵝膏。原來(lái)希望能通用性識(shí)別所有含鵝膏毒肽的物種，但是發(fā)現(xiàn)只能鑒定鵝膏菌，不能識(shí)別含鵝膏毒肽的其它屬的物種，文章也分析了原因。該文得到了2個(gè)審稿專家的很好評(píng)價(jià)。”

9種劇毒鵝膏菌子實(shí)體形態(tài)圖

劇毒鵝膏菌恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)流程

基于α-鵝膏毒肽毒素基因超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)劇毒鵝膏結(jié)果

劇毒鵝膏菌LAMP通用性檢測(cè)結(jié)果　　

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　　https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0308814619311331

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　　https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2019.01523/abstract