GB/T15673─1995
1主題內(nèi)容與適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食用菌中粗蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于食用菌中粗蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。
2引用標(biāo)準(zhǔn)
GB12530 食用菌取樣方法
GB12531 食用菌水分測(cè)定
3方法提要或原理
采用半微量凱氏定氮法，即在加速劑存在下，以硫酸破壞樣品中有機(jī)物，加堿蒸餾，滴定所釋放的氨，計(jì)算出其含氮量。含氮量乘上換算系數(shù)6.25即得樣品的粗蛋白質(zhì)量。菇類可消化蛋白質(zhì)是粗蛋白的70％左右，含氮量乘上4.38，即為可消化蛋白質(zhì)的含量。
4試劑
分析中，除另有說明，均限用分析純?cè)噭?、蒸餾水或相當(dāng)純度的水。
4.1硫酸(GB625)：分析純或化學(xué)純，密度1.84g/mL。
4.2鹽酸(GB622)：密度1.18g/mL。
4.3氫氧化鈉溶液：濃度400g/L，用分析純或化學(xué)純氫氧化鈉(GB629)配制。
4.4硼酸(GB628)溶液：濃度20g/L，為蒸餾時(shí)的吸收液。
4.5加速劑：將600g硫酸鉀(HG3―920)和100g五水合硫酸銅(GB665CuSO4?5H2O)混勻，充分研磨后過40目篩，試劑瓶?jī)?nèi)密封保存。
4.6鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：濃度0.05mol/L或0.1mol/L，用無水碳酸鈉或鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)定其濃度，精確到小數(shù)點(diǎn)后第四位。
4.7甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑：50mL濃度為2g/L的溴甲酚綠(HG3―1220)95％乙醇(GB679)溶液和10mL濃度為2g/L的甲基紅(HG3―958)95％乙醇溶液混合。
5儀器、設(shè)備
5.1電熱鼓風(fēng)干燥箱。
5.2小型植物粉碎機(jī)：備有1mm孔徑的金屬篩網(wǎng)。
5.3分樣篩：備有孔徑0.42mm(40目)和孔徑0.84mm(20目)篩子。
5.4玻璃研缽：備有研杵。
5.5廣口瓶：帶磨口。
5.6剪刀和小刀。
5.7分析天平：感量0.0001g。
5.8扭力天平。
5.9可調(diào)電爐：0～600℃。
5.10通風(fēng)櫥。
5.11消煮架：鐵制，可使凱氏瓶在消煮時(shí)與垂直方向成30°～45°角。
5.12硬質(zhì)凱氏瓶：容積100mL。
5.13半微量凱氏定氮蒸餾裝置。
5.14半微量滴定管：10mL。
5.15彎頸三角漏斗：直徑25mm。
5.16錐形瓶：250mL。
6樣品
6.1取樣方法和數(shù)量
6.1.1干制品(蘑菇干片、干香菇、黑木耳和銀耳等)按GB12530中規(guī)定要求進(jìn)行?？偭坎坏蒙儆?00g。
6.1.2鮮菇在每批不同的地方隨機(jī)取樣作為原始樣品，總量不得少于1000g。
6.2試樣的制備
6.2.1干品直接用剪刀剪成小塊，在80～100℃干燥箱中烘至發(fā)脆后冷卻，立即用小型植物粉碎機(jī)粉碎。棄去開始粉碎出的樣品(約占總樣十分之一)。粉碎過的樣品均需過40目篩。未能過篩部分再次粉碎或經(jīng)研缽內(nèi)研磨之后再過篩，直至全部樣品過篩為止。銀耳和木耳樣品因質(zhì)地關(guān)系經(jīng)粉碎后大部分樣品不能過40目篩，故要求全部樣品過20目篩，過篩后的樣品裝入清潔的廣口瓶?jī)?nèi)保存?zhèn)溆?。樣品密封后填寫?biāo)簽，注明品名、日期、交樣單位和取樣人等。
6.2.2鮮菇取樣后立即切成4mm厚度的菇片，鮮耳則用手撕成小塊均勻地?cái)傇诟稍锵鋬?nèi)墊有紗布的鐵絲網(wǎng)上，50℃鼓風(fēng)干燥6h以上。待樣品半干后再逐步提高溫度至80～100℃。樣品發(fā)脆之后冷卻，立即用粉碎機(jī)粉碎。其他操作同干品。
7分析步驟
7.1稱樣：稱取試樣0.3～0.5g(蘑菇、香菇、草菇和平菇等高蛋白質(zhì)的樣品為0.3g，木耳、銀耳和茯苓等低蛋白質(zhì)含量的樣品則為0.5g)，精確到0.0001g。同時(shí)按GB12531中規(guī)定的方法稱樣測(cè)定試樣的含水量。
7.2消煮：試樣無損地倒入凱氏瓶中，加入加速劑粉末(4.5)3.5g，混勻，最后加入濃硫酸(4.1)5mL，輕輕搖動(dòng)凱氏瓶使試樣完全濕潤(rùn)。消煮時(shí)利用消煮架將凱氏瓶斜放在電爐上加熱。瓶口加彎頸三角漏斗。開始時(shí)緩慢地加熱，待瓶?jī)?nèi)硫酸液沸騰后，調(diào)節(jié)電爐溫度，防止泡沫沖到凱氏瓶頸上。經(jīng)常旋轉(zhuǎn)凱氏瓶，直至有機(jī)物完全炭化、泡沫消失為止。隨后用猛火加熱，使溶液不斷處于沸騰狀態(tài)。溶液變清呈綠色之后繼續(xù)加熱0.5h后結(jié)束。整個(gè)過程在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。
7.3蒸餾：裝好半微量定氮蒸餾裝置。使用前用蒸餾水沖洗干凈。在蒸氣發(fā)生瓶?jī)?nèi)加入2/3～3/4容積的蒸餾水。將冷凝管下端插入盛有10mL硼酸吸收液(4.4)的250mL錐形瓶液面下，吸收液中預(yù)先加入5～6滴混合指示劑(4.7)。通電加熱，待蒸氣產(chǎn)生后開始蒸餾。從加樣口將凱氏瓶中消煮好的樣品液倒入，并用蒸餾水沖洗凱氏瓶數(shù)次，確保樣品全部加入。立即加入氫氧化鈉溶液(4.3)20mL，使樣品溶液呈強(qiáng)咸性。加樣口蓋塞封閉，通入蒸氣，使反應(yīng)室內(nèi)蒸餾液猛烈沸騰，釋入出的氨被吸收液所吸收，待吸收液開始變綠色之后繼續(xù)蒸餾5～6min，吸收液總量達(dá)100mL左右時(shí)停止蒸餾。
7.4滴定：取出吸收瓶，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液(4.6)將吸收液由藍(lán)綠色滴定至灰紫色為終點(diǎn)。
7.5空白試驗(yàn)：不加試樣的加速劑和濃硫酸作為空白樣品，按上述步驟同時(shí)進(jìn)行測(cè)定?？瞻自囼?yàn)所消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積須小于0.25mL。
8分析結(jié)果的計(jì)算
8.1計(jì)算
粗蛋白質(zhì)(干基，％)＝〔c(V2-V1)×0.014×6.25〕/〔m(1-X)〕×100
式中：c──
鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；
V1──空白試驗(yàn)滴定消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；
V2──樣品滴定消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；
m──樣品的質(zhì)量，g；
0.014──氮的摩爾質(zhì)量，g/mmol；
X──樣品含水量，％；
6.25──氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù)。
8.2允許差
取平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，保留小數(shù)后一位。
平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.2％。
