第五節(jié)　菌種質量鑒定與復壯

一、菌種質量標準

１、一級種（俗稱母種）：在同一種培養(yǎng)基上具有原菌株的菌落形態(tài)特征，無病蟲雜菌，菌絲潔白，生長健壯有力，邊緣整齊，不發(fā)黃，不老化，菌齡掌握在剛長滿斜面即用于擴接原種或繼代培養(yǎng)。

２、二級種（俗稱原種）：無感染病蟲雜菌，菌絲潔白，粗壯濃密，均勻布滿瓶周，外見顏色一致，無不均勻斑，培養(yǎng)基由棕黑色轉為淡棕黃色，有蘑菇特有香味，菌絲不萎縮，不發(fā)黃，接種后應在40-50天長滿瓶,菌齡掌握在菌絲長滿瓶10天左右使用。

３、三級種（俗稱栽培種）：無感染病蟲雜菌，菌絲潔白玉米黃，粗壯有力，均勻布滿瓶周，外觀顏色大體一致，無明顯不均勻斑，培養(yǎng)基成淡棕黃色，有蘑菇特有香味，培養(yǎng)基不萎縮，不吐黃水，接種后菌絲應在30-45天長滿瓶,菌齡掌握在菌絲長滿瓶后15天內使用。

二、菌種質量鑒定：

１、直接觀察　首先用肉眼觀察包裝是否合乎要求，棉塞有無松動，試管、玻璃瓶或塑料袋有無破損，棉塞和試管、瓶或袋中有無病蟲侵染，菌絲色澤是否潔白均勻，有無發(fā)生老化。然后在瓶塞邊作深吸氣，聞是否具有蘑菇菌種特有的香味，原種和栽培種可取出小塊菌絲體觀察其顏色和均勻度，并用手指捏料塊檢查含水量是否符合標準。

２、顯微鏡檢查　在載玻片上滴一滴蒸餾水，然后挑取少許菌絲置水滴上，讓菌絲體充分展開，蓋好蓋玻片，再置顯微鏡下觀察。也可通過菌絲體染色后鏡檢觀察。蘑菇菌絲體應粗壯，菌絲節(jié)較長，呈分枝狀，說明是正常菌種，如果菌絲節(jié)很短，分枝很濃密，菌絲較纖細，生長緩慢，一般為不正常菌種。

３、菌絲生長速率測定

　　將所獲的菌種，轉接至PDA 培養(yǎng)皿中央, 待菌絲身皿邊輻射蔓管時, 用直徑0.5cm的打孔器,經(jīng)滅菌后打取邊緣菌絲,邊同培養(yǎng)基重新接入PDA 培養(yǎng)皿中央進行培養(yǎng),每隔24小時,測定菌落直徑,直至菌落覆蓋全皿為止,從而耱出菌絲平均生長速度。

４、耐高溫測定

　　先將母種試管數(shù)支置于24℃下培養(yǎng),10天后取出部分試管置30℃下培養(yǎng),24小時后再放回24℃下培養(yǎng),經(jīng)過高溫的處理,如果菌絲仍然健壯,旺盛生長,則表明該菌種具有耐較高溫度的優(yōu)良特性,也可將母種試管移接至草基試管培養(yǎng)基中,置24℃下培養(yǎng)5天正常生長后,把試管置28℃下進行培養(yǎng), 如果菌絲能較正常生長也表明該品種具有耐較高溫度的優(yōu)良特性。

５、 吃料能力鑒定　將試管母種接入新鮮配制的裝在試管中的糞草培養(yǎng)基中， 置24℃下進行培養(yǎng),5天后觀察菌絲生長情況,如果菌種塊能很快萌發(fā),并迅速向培養(yǎng)料中生長伸展,則說明該品種的吃料能力強;如果菌種萌發(fā)后生長緩慢, 遲遲不向四周和料層深處伸展,則表明該品種對培養(yǎng)料的適應能力差,是劣質菌種。

６、生理特征測定　蘑菇菌種的生理特征測定包括酶活力測定和遺傳分析兩方面。酶活力測定主要是進行纖維素酶活力的測定，遺傳分析主要是進行酯酶同工酶的檢測，以及RAPD檢測等,分析該品種的遺傳物質是否保持原有品種的特征帶,如果遺傳分析發(fā)現(xiàn)主要標記酶帶或擴增帶發(fā)現(xiàn)變異說明該品種有可能出錯或已發(fā)生變異, 是劣質菌種。

三、菌種的退化與復壯

１、菌種的退化

　　菌種在傳代過程中，因遺傳物質發(fā)生變異而引起的使原有的優(yōu)良性狀漸漸消失或變壞，出現(xiàn)長勢差、出菇遲、產(chǎn)量不高、質量不好、子實體叢生等現(xiàn)象。這些現(xiàn)象人們泛稱為“退化”。“退化”是一個群體概念，即栽培中子實體群體中有少數(shù)子實體與親本不同，不能算退化，只有相當一部分乃至大部分個體的性狀都明顯變劣，群體生長性能顯著下降時，才能視為菌種退化。菌種退化往往是一個漸變的過程，菌種退化只有在發(fā)生有害變異的個體在群體中顯著增多以至占據(jù)優(yōu)勢時才會顯露出來。因此盡管個體的變異可能是一個瞬時的過程，但菌種呈現(xiàn)“退化”卻需要較長的時間。

２、菌種發(fā)生退化的原因

（１）菌種混雜　在菌種繼代培養(yǎng)過程中，不同品種間交叉感染，導致不同品種的菌絲體混雜在一起，菌絲生長發(fā)生變異，導致原有品種生產(chǎn)性狀的改變，常常表現(xiàn)出產(chǎn)量下降、質量變劣等。

（２）有害突變的發(fā)生　一般來說，一個正常菌株經(jīng)過多代移植，不會導致遺傳性狀的改變。但是如果一個菌株的菌絲細胞中發(fā)生有害突變，而且突變體能適應外界環(huán)境條件。那么，隨著移接次數(shù)的增加，有害突變體在菌絲細胞群中所占的比例會逐漸增大。這樣，該菌株的生產(chǎn)性能就會隨之惡化，退化現(xiàn)象就逐漸顯現(xiàn)出來。

（３）雜交菌株的雙親核比例失調　雜交菌株的菌絲體在轉管過程中，受到外界環(huán)境、營養(yǎng)條件等改變的影響，其中一個親本的核發(fā)育正常逐漸占據(jù)優(yōu)勢而另一親本的核可能不適應而逐漸減弱，這樣導致雙核比例的失調，隨著擴管代數(shù)的增加，核比例失調逐漸擴大，最終導致在栽培中表現(xiàn)出退化現(xiàn)象。

（４）病毒的感染　菌種感染病毒后，病毒不僅會隨著菌絲體的擴大繁殖而增加，而且會通過帶毒孢子傳染下一代。當菌種攜帶一定濃度的病毒粒子，在栽培中都會表現(xiàn)出明顯減產(chǎn)，菇質量下降等退化現(xiàn)象。

四、防止菌種退化的措施

（１）要防止菌種的混雜，在菌種轉管，進行出菇試驗等工作中，均應加強品種隔離，減少品種間的混雜，以保證優(yōu)良品種的遺傳組成在較長時間內能保持足夠的穩(wěn)定。

（２）控制菌種傳代次數(shù)　菌種傳代次數(shù)越多，產(chǎn)生變異的機率就越高，因此菌種發(fā)生退化的概率就會越多，生產(chǎn)中應嚴格控制菌種的移接代數(shù)。

（３）采用有效的菌種保藏方法保存菌種　菌種保存應是短期、中期和長期三者相結合，根據(jù)不同的要求從不同保藏方法中進行擴和移接，確保菌種能長期保持該品種的原有優(yōu)良性狀。

（４）創(chuàng)造菌種生長良好營養(yǎng)條件和外界環(huán)境　菌種培養(yǎng)基的營養(yǎng)條件應適宜，才能使菌種生長健壯，減少退化的發(fā)生。營養(yǎng)不足和過于豐富對菌種生長均不利。菌種的生長繁殖受到物理、化學、生物等外界條件的影響，如條件適宜，菌種生長正常，不易退化，不相適宜，則會引起菌種的退化。比如芳香族化合物，能誘發(fā)絨毛狀菌絲體成扇形菌落的形成，這種菌絲體在料床上易形成致密的白斑，導致產(chǎn)量下降。

（５）對菌種可能遭受病毒的感染應保持足夠的警惕。對有疑問的菌種要及時檢驗。確證已感染病毒，尤其是病毒粒子含量大，菌絲體及子實體性狀已受到嚴重影響的菌種，應及時淘汰。

４、菌種的復壯

（１）菌絲尖端分離進行提純復壯，在顯微鏡下應用顯微操作器把菌絲尖端切下轉移至新瓶的PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，這樣可以保證該菌種的純度， 并且可以起到脫病毒的作用，使菌種保持原有品種的遺傳物質，恢復原來的生活力和優(yōu)良種性，達到復壯的目的。

（２）適當更換培養(yǎng)基，長期在同一培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)的菌種，生活力可能逐漸下降。將碳源、氮源、碳氮比、維生素、礦物質營養(yǎng)作適當調整，對因營養(yǎng)基質不適而衰退的菌種，有一定的復壯作用。

（３）菌種分離，要有計劃的把無性繁殖和有性繁殖的方法交替使用，反復進行無性繁殖菌種會不斷衰退，而經(jīng)有性繁殖所產(chǎn)生的孢子，是食用菌生活史的起點，具有豐富的遺傳特性，因此必須定期進行蘑菇菌株的單孢分離篩選，從中優(yōu)選出具有該品種原來優(yōu)良性狀的新菌株，逐漸替代舊菌株，這樣就可不斷地使該品種得到恢復，長期使用。