靈芝菌種的保藏與復(fù)壯
      一、茵種保藏
      要保持靈芝菌種的新鮮、優(yōu)質(zhì)，必須妥善保藏菌種，使靈芝菌株新陳代謝速率減緩，避免菌種衰老死亡，可置菌種在清潔干燥、冷凍、低溫、缺氧的環(huán)境中保存?，F(xiàn)具體介紹以下幾種方法：
      (一)試管斜面低溫(冰箱)保藏法 在母種試管外面包一層塑料薄膜或牛皮紙，以防水分蒸發(fā)，而后置于冰箱內(nèi)4℃條件下保存，菌絲在此溫度下幾乎停止生長而處于"休眠"狀態(tài)，代謝作用緩慢從而延長保存時間。
      保存過程中要注意幾點(diǎn)：
      1．溫度不能太低，否則斜面培養(yǎng)基易脫水結(jié)白而凍死菌種。
      2．低溫保存的菌種，每隔三四個月須轉(zhuǎn)管一次。
      3．保存期間要經(jīng)常檢查棉塞是否受潮，否則要及時更換棉塞(無菌棉塞)，以免感染雜菌。
      4．對于低溫保存較長的菌種，使用前必須先把菌種放在適宜溫度下讓其"蘇醒"，恢復(fù)菌絲的生命活力。
      該方法簡單易行，設(shè)備儀器簡便，應(yīng)用范圍廣，無論科研單位還是栽培生產(chǎn)單位，都可采取低溫保存菌種，但由于經(jīng)常要轉(zhuǎn)接試管，代數(shù)過多會退化菌種，且費(fèi)工費(fèi)時。
      (二)石蠟保藏法 將要保存的靈芝菌種移接到cpda培養(yǎng)基斜面上，在25度左右的恒溫中培養(yǎng)7天左右，然后用液體石蠟封藏保存。石蠟要選化學(xué)性純的，首先在121度下高壓滅菌30-60分鐘，連續(xù)滅菌2次，再用無菌吸管灌注到斜面上，液體石蠟以高出斜面尖端1厘米為宜，然后置于室內(nèi)干燥處或冰箱中保存，用石蠟封閉，隔絕了菌絲與空氣接觸，防止水分蒸發(fā)，菌株新陳代謝減緩，菌種保存時間延長，一般可保存5年以上，但以l.2年移植一次為好。
      需用菌種時，從試管中抽取菌絲移植到pda培養(yǎng)基斜面上進(jìn)行活化培養(yǎng)，即可作菌種用。
      保存過程中要注意幾點(diǎn)：
      1．為防止封閉石蠟后靈芝菌絲再生長，應(yīng)適當(dāng)延長菌絲的培養(yǎng)時間。
      2．倒入的石蠟不能低于斜面尖端，否則液體石蠟揮發(fā)快，斜面培養(yǎng)基易干涸。
      3．石蠟滅菌要徹底，否則菌種易感染雜菌。
      4．定期檢查棉塞是否污染，培養(yǎng)基是否露出石蠟液面，如露出液面，要及時灌注無菌石蠟。
      5．菌種必須垂直放置，否則棉塞易受污染。
      (三) 白膠塞封口 保存法選擇與試管口徑相符合的白膠塞，用0.2％煤酚皂溶液洗滌，浸泡在95％乙醇內(nèi)保存。當(dāng)試管斜面長滿菌絲后，無菌操作，拔去棉塞，取浸泡的白膠塞一個，通過火焰快速塞入試管口，并用石蠟封存。
      此法與石蠟保存效果相同，一般可保存菌種幾年，但以每年移植一次為好。
      (四) 麥鼓保存菌種法 　選取新鮮的麥鼓用適量的清水調(diào)濕，然后裝入試管，占試管總長的五分之二，洗凈管壁上的麥麩，塞好棉塞，常規(guī)方法滅菌后接種培養(yǎng)，5至7天后，當(dāng)菌絲長滿培養(yǎng)基表面，放入真空干燥器中將培養(yǎng)基內(nèi)水分抽干，然后移入盛有氯化鈣的干燥器內(nèi)，用凡士林密封，常溫下保存。此法保存靈芝菌種存活力在1年以上。制作過程中注意滅菌徹底，無菌操作。
      (五) 木屑保存菌種法　 選用闊葉雜木屑78％、麥麩20％、白糖、石膏各1％，加適當(dāng)?shù)乃{(diào)濕，分裝試管，占試管的三分之四長，在1.2至1.5公斤每平方厘米高壓下滅菌40分鐘左右，冷卻后無菌接入靈芝菌種，適宜條件下培養(yǎng)10~15天，菌絲接近長滿木屑時，用石蠟熔封管口，或換上無菌白膠塞，置常溫或冰箱中保存。
      該法只要木屑不干涸，可保持菌種活力3年以上，保存時應(yīng)注意：
      1．木屑只能用闊葉雜木屑，松、杉、樟樹等有芳香氣味的不能用。
      2．水分含量適宜，滅菌徹底。
      (六) 木塊保存菌種法 　將闊葉樹木切成1立方厘米或1厘米×1厘米×2厘米的小木塊，把木塊置于1％葡萄糖水中浸泡，濕透，或用0.2％磷酸二氫鉀、0.3％的尿素配制液中浸泡2小時，然后按20％木屑、80％木塊比例混合，含水量60％-70％左右，拌勻后裝入試管，試管最下部與上部均有1~2厘米厚的木屑，中間為木塊，裝好試管后高壓滅菌40分鐘，冷卻后接種培養(yǎng)7天，然后取出，密封管口，置冰箱中保存。
      (七) 地下保存法 　在室內(nèi)陰涼處挖個坑，埋一只小壇子，壇口低于地面，四周填實(shí)，上面用水泥抹平并澆制一只蓋子，使用時用塑料袋裝些生石灰，放人壇底，把要保存的菌種用薄膜包扎好后放人壇內(nèi)，蓋好壇蓋即可。一般每2-3個月轉(zhuǎn)管一次。
      二、靈芝茵種的復(fù)壯
      靈芝菌種在生產(chǎn)應(yīng)用中，經(jīng)多次無性繁殖和其他條件的影響，常常出現(xiàn)菌種老化和退化，接種后菌絲生長緩慢，纖細(xì)，菌絲稀疏，栽培出的靈芝會變形、變小而畸形，因此必須采取措施，進(jìn)行菌種的復(fù)壯，一般采取以下幾個措施：
      1．培養(yǎng)基滅菌時間和溫度要切實(shí)掌握，酸堿度要適宜。
      2．制作培養(yǎng)基的配方靈活掌握，經(jīng)常更換，幾種培養(yǎng)基可交替使用。
      3．菌種培養(yǎng)溫度、濕度適宜，嚴(yán)防高溫高濕，杜絕雜菌污染。
      4．母種轉(zhuǎn)管次數(shù)不能太多，一般不超過5代。
      5．靈芝菌種每年復(fù)壯一次，選擇個體大，菇形漂亮、健壯無病蟲害的子實(shí)體進(jìn)行組織分離或孢子分離，再去劣存優(yōu)，進(jìn)行擴(kuò)大繁殖，提高菌種質(zhì)量。