食用菌復(fù)合保水顆粒菌種生產(chǎn)工藝及其應(yīng)用研究
冀宏 陳文杰 霍紅 韓韜 朱朝輝
?（河北省微生物研究所，河北保定071051）
食用菌菌種生產(chǎn)是食用菌生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)之一。菌種質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到食用菌生產(chǎn)的成敗。目前，食用菌原種和栽培種常用棉籽殼、木屑、玉米芯為主料配制培養(yǎng)基，或用谷粒、麥粒、玉米等天然粒狀基質(zhì)生產(chǎn)顆粒菌種??［1］?。顆粒菌種使用方便，但因為以糧食為營養(yǎng)基質(zhì)，成本較高。筆者以草粉為主料，研制出一種人工營養(yǎng)顆粒，并建立了一種以此為營養(yǎng)基質(zhì)生產(chǎn)顆粒菌種的生產(chǎn)工藝。
1材料與方法
?1.1保水劑
?保水劑由河北省微生物研究所食用菌研究室自行配制。
?1.2供試菌株
?糙皮側(cè)耳?(Pleurotusostreatus)?2019，金針菇?(Flammulinavelutipes)?FV093，杏鮑菇?(Pleurotuseryngii)?TW1，靈芝?(Ganodermalucidum)?，鮑魚菇?(Pleurotusabalonus)?臺灣1號，由河北省微生物研究所食用菌研究室提供；雙孢蘑菇?(Agaricusbisporus)?As2796，購自福建省三明真菌研究所；白靈菇?(Pleurotusnebrodensis)?KW1，購自武漢新宇食用菌研究所；雞腿蘑?(Coprinuscomatus)?大體2號，由河北省微生物研究所食用菌研究室野外采集馴化而得。
?1.3培養(yǎng)基
?1.3.1搖瓶培養(yǎng)基?玉米粉1%，豆餅粉1%，煮沸20min后過濾取汁，加葡萄糖2%，酵母膏0.1%，KH?2PO?40.1%，MgSO?40.1%。
?1.3.2栽培培養(yǎng)基?棉籽殼78%，麩皮20%，葡萄糖1%，石膏1%。
?1.4工藝流程
?將原料按配比混勻，用造粒機制成適于食用菌生長的營養(yǎng)顆粒，于105℃經(jīng)2h烘干，高壓滅菌。將經(jīng)搖瓶培養(yǎng)的菌絲發(fā)酵液于無菌條件下接種于營養(yǎng)顆粒，置25℃室溫下無菌開放式培養(yǎng)，培養(yǎng)期10d，檢驗無雜菌后即可包裝出廠。
?T5H1.5顆粒菌種的制備
?1.5.1營養(yǎng)顆粒配方的選擇?以稻草粉(10%～65%，以+5%為一梯度)，芒草粉(65%～10%，以-5%為一梯度)和25%薯藤粉為主料，配合保水劑和多種營養(yǎng)物質(zhì)(酵母膏1g，MgSO?40.1%，KH?2PO?40.2%，葡萄糖20g，維生素C4片，200g玉米粉煮水過濾液1000mL)設(shè)計12個配方，分別測定其抗壓強度（測定方法見參考文獻(xiàn)［2］）和崩解時間（測定方法見參考文獻(xiàn)［3］），以抗壓強度高、崩解時間長的配方(稻草粉35%，芒草粉40%，薯藤粉25%，配合保水劑及營養(yǎng)物質(zhì))為首選配方。
?1.5.2營養(yǎng)顆粒的接種
?1.5.2.1菌絲發(fā)酵液的制備將糙皮側(cè)耳、靈芝、金針菇、雙孢蘑菇、雞腿蘑和白靈菇試管菌種接入盛有200mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL搖瓶中，于25±1℃，220r/min條件下培養(yǎng)。
?1.5.2.2營養(yǎng)顆粒接種方法按所選配方制備營養(yǎng)顆粒，將菌絲發(fā)酵液與營養(yǎng)顆粒混合。
?1.5.2.3菌絲發(fā)酵液培養(yǎng)時間的選擇分別取糙皮側(cè)耳、靈芝、金針菇、雙孢蘑菇、雞腿蘑和白靈菇培養(yǎng)24h、48h、72h、96h和120h的菌絲發(fā)酵液接種于營養(yǎng)顆粒，培養(yǎng)并記錄菌絲長滿營養(yǎng)顆粒所需時間。
?1.5.2.4菌絲發(fā)酵液接種量的選擇分別取糙皮側(cè)耳、靈芝、金針菇、雙孢蘑菇、雞腿蘑和白靈菇菌絲發(fā)酵液50、55、60和65mL，一一接入50g營養(yǎng)顆粒中，觀察菌絲發(fā)酵液的添加量對營養(yǎng)顆粒的影響以及菌絲長滿營養(yǎng)顆粒所需的時間。
?1.5.3顆粒菌種的培養(yǎng)?接種后的營養(yǎng)顆粒置25±1℃下培養(yǎng)至菌絲長滿營養(yǎng)顆粒。
?1.6顆粒菌種保存期試驗
?以糙皮側(cè)耳2019制備顆粒菌種，分別采用瓶裝和真空包裝置室溫下保存，于第25天、第35天、第45天和第60天分別取樣接入栽培培養(yǎng)基，測定菌絲生長速度。
?1.7顆粒菌種栽培試驗
?以糙皮側(cè)耳、靈芝、金針菇、杏鮑菇的顆粒菌種和棉籽殼原種接種栽培培養(yǎng)基，進行發(fā)菌和出菇管理，測定菌絲生長速度、現(xiàn)蕾時間和生物學(xué)效率。
結(jié)果與分析
?2.1營養(yǎng)顆粒配方的確定
?營養(yǎng)顆粒12個配方的抗壓強度和崩解時間見表1。
?T5H2.2菌絲發(fā)酵液最佳培養(yǎng)時間
?不同培養(yǎng)時間的菌絲處于不同的生長時期和不同的生理狀態(tài)，具有不同的生物量。由?表2?可知，所試菌種搖瓶培養(yǎng)96h后接種營養(yǎng)顆粒，菌絲生長速度快，菌絲長滿顆粒所需時間短。培養(yǎng)時間過短，菌絲生物量較?。慌囵B(yǎng)時間過長，則菌絲易老化。
?2.3菌絲發(fā)酵液最佳接種量
?加入菌絲發(fā)酵液過少，營養(yǎng)顆粒干燥，不利于菌絲萌發(fā)、生長；加入菌絲發(fā)酵液過多，營養(yǎng)顆粒潮濕易碎。另一方面，接種量的大小也直接影響菌絲長滿顆粒所需時間。表3的結(jié)果表明，菌絲發(fā)酵液體積與營養(yǎng)顆粒重量之比為1.1∶1時，營養(yǎng)顆粒濕度適中，菌絲生長較快。
?
表1不同配方營養(yǎng)顆粒的抗壓強度和崩解時間
?TablelBrokentimeandcompressivestrengthofnutrientgranulesofdifferentformulae
配方編號
Noof
The
formulae
崩解時間Brokentime?(s)
抗壓強度?Compressive
strength(N)
配方編號Noofthe?formulae
崩解時間Brokentime?(s)
抗壓強度?Compressive
strength(N)
1
30
21.2
7
120
43.4
2
75
58.5
8
120
51.2
3
30
23.6
6
90
49.8
4
570
85.5
10
65
45.6
5
100
46.7
11
45
33.8
6
630
88.2
12
30
26.0
?表2不同培養(yǎng)時間菌絲發(fā)酵液接種的營養(yǎng)顆粒充分發(fā)菌所需時間
?Table2Fullspawn?runtimeofthenutrientgranulesinoculated?withthesubmerge?culturedmyceliafermentedfordifferenttimes(d)
菌種?Strains
培養(yǎng)時間Culturetimes（h）
24
48
22
96
120
糙皮側(cè)耳?P.ostreatus
32
28
15
10
12
靈芝G.lucidum
30
25
13
11
14
金針菇F.velulipes
-1)
35
22
15
14
雙孢蘑菇A.bisporus
-
>30
25
17
15
雞腿蘑C.comatus
>30
30
20
12
12
白靈菇P.nebrodensis
-
>30
23
18
16
1)?-表示菌絲不生長；-indicatedthatthemyceliadidnotgrowT
?表3不同菌絲發(fā)酵液接種量對菌絲長滿營養(yǎng)顆粒所需時間的影響
?JZ(Table3Effectoftheinoculationrateofthesubmerge?culturedmyceliaonthefullspawn?runtimeofthemutrientgranules(d)
菌種?Strains
接種量Inoculationrate(mL)??1)
50(1:1)
55(1:1:1)
60(1.2:1)
65(1.3:1)
糙皮側(cè)耳?P.ostreatus
40
10
15
-2)
靈芝G.lucidum
-2)
12
17
17
金針菇F.velulipes
-2)
15
18
18
雞腿蘑C.comatus
38
120
13
38
杏鮑菇P.eryngii
45
11
14
45
1)?括號中的數(shù)據(jù)表示菌絲發(fā)酵液體積與營養(yǎng)顆粒重量的比值
?Datainthebracketsindicatedtheratiooftheinoculationvolumeofthesubmerge?culturedmyceliatotheweightofthenutrientgranules
2)?“-”表示因營養(yǎng)顆粒干濕度不當(dāng)，食用菌菌絲生長極其緩慢而被淘汰
?“-”indicatedthatthenutrientgranuleswereeliminatedbecauseofthegranulesbeingtoowetortoodry,sothemyceliagrewslowest
?表4糙皮側(cè)耳2019顆粒菌種保存期對菌絲生長速度的影響
?Table4EffectofthepreservationtimeonthemycelialgrowthrateofWTHXP.ostreatusgranularspawn
菌種保存時間?Preservationtimeofthespawn（d）
菌絲生長速度Mycelialgrowthrate(cm/d)
瓶裝菌種Bottledspawn
真空包裝菌種Vacuumpackingspawn
25
0.427
0.430
35
0.415
0.442
45
0.351
0.423
60
現(xiàn)蕾Primordiuminitiation
0.395
?2.4顆粒菌種的保存期
?瓶裝糙皮側(cè)耳2019顆粒菌種室溫放置35d，接種栽培培養(yǎng)基，菌絲活力未受影響;保存45d，菌絲活力略有下降；保存60d時，菌種成熟現(xiàn)蕾。真空包裝的糙皮側(cè)耳顆粒菌種保存60d，接種后仍顯示較快的菌絲生長速度（表4）。靈芝、金針菇、雞腿蘑、杏鮑菇、雙孢蘑菇、白靈菇和鮑魚菇的顆粒菌種，在菌種保存期試驗中的表現(xiàn)基本相同。
?2.5栽培試驗
?由表5可見，使用顆粒菌種與使用棉籽殼菌種接種栽培培養(yǎng)基，菌絲生長速度、現(xiàn)蕾時間、生物學(xué)效率均無顯著差異，表明顆粒菌種各項指標(biāo)均能達(dá)到棉籽殼菌種水平。
?表5栽培試驗結(jié)果
?Table5Resultsofthecultivationtest
菌株?Strains
菌絲生長速度?Mycelialgrowthrate(cm/d)
現(xiàn)蕾時間?Primordiuminitiationtime(d)
生物學(xué)效率?Biologicalefficiency(%)
顆粒菌種?Granular?spawn
棉籽殼菌種?Cottonseed?hullspawn
顆粒菌種?Granular?spawn
棉籽殼菌種?Cottonseed?hullspawn
顆粒菌種?Granular?spawn
棉籽殼菌種?Cottonseed?hullspawn
靈芝?G.lucidum
0.411
0.412
41.8
42.1
122.0
120.0
糙皮側(cè)耳P.ostreatus
0.439
0.432
34.0
33.0
127.0
128.0
金針菇F.velutipes
0.423
0.420
40.0
39.0
87.0
87.0
杏鮑菇P.eryngii
0.400
0.411
36.0
35.0
73.2
72.8
?3討論
?3.1以草粉為主料制備營養(yǎng)顆粒，原料來源廣泛，價格低廉，適合多種食用菌生長。
?3.2保水劑是一種人工合成材料，對周圍環(huán)境中的水分具有雙向調(diào)節(jié)作用，在食用菌栽培中已有應(yīng)用??［4］?。筆者對其在制備顆粒菌種中的應(yīng)用作了初步研究，證明其對防止?fàn)I養(yǎng)顆粒中水分散失、延長菌種保藏期有一定作用。
?3.3由于菌絲生長到營養(yǎng)顆粒內(nèi)部，不易受環(huán)境影響，能長期保持活力，性狀穩(wěn)定，不易老化。顆粒菌種便于運輸，可作為原種也可作為栽培種使用，既可用于代料栽培，也可用于段木栽培。
?3.4本生產(chǎn)工藝需深層發(fā)酵設(shè)備及造粒設(shè)備，普通菇農(nóng)不易掌握，但它適于工業(yè)化、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，可由一定規(guī)模的菌種場生產(chǎn)，再分發(fā)至菇農(nóng)，有利于菌種質(zhì)量的均一和穩(wěn)定。
??參考文獻(xiàn)
?［1］任桂梅，延志蓮.顆粒制作食用菌原種技術(shù)要點［J］.延安大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），1996.15（3）：69～71.
?［2］國家技術(shù)監(jiān)督局.中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB15063-94［S］，1994．
?［3］中國發(fā)酵工業(yè)協(xié)會.工業(yè)用酶制劑行標(biāo)準(zhǔn)［S］.1993，10.
?［4］藤小玲，楊文斌.保水劑在姬菇栽培上的應(yīng)用［J］.食用菌，1992，14（3）：10.
